公司產品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

1、細胞傳代：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入 5ml 培養(yǎng)

液終止消化，再輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀細胞用 1-2ml 培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進行分瓶傳代，最后放入 37℃，5%CO2細胞

培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

2、細胞凍存：

1）細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終

止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細胞，并放置于凍存管中；

4）先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h 后轉入液氮中進行長期保存。使用程序

降溫盒可直接放入-80℃。

一、商品介紹：

二、細胞培養(yǎng)操作

1) 復蘇細胞：以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產品說明書為主。將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代：如果細胞密度達 80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進行細胞計數。

b、根據細胞數量加入無血清細胞凍存液，使細胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細胞懸液，注意凍存管做好標識。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

公司正在出售的產品：

Y3-Ag 1.2.3大鼠骨髓瘤細胞 Myeloma cells in Y3-Ag 1.2.3 rats DMEM培養(yǎng)基+10%FBS 大鼠乙醇脫氫酶(ADH)ELISA 試劑盒 RV IgM 風疹胞病毒 IgM(間接法二步法)

MRC2： 巨噬細胞甘露糖受體2抗體 GP1BB Others Human 人 GP1Bβ / CD42c 人細胞裂解液 (陽性對照)

皮膚肥大細胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml) 大鼠胰脂肪酶(PL)ELISA試劑盒 RV IgM 風疹病毒 IgM(捕獲法一步法)

MNAT1： 細胞周期G1的相互作用蛋白抗體 小鼠T淋巴細胞;Cl.Ly1+2-/9

hFOB 1.19(SV40轉染人成骨細胞) 5×106cells/瓶×2 產氣腸桿菌 大鼠胰腺再生蛋白Iα(REG1α)ELISA試劑盒 Fc GammaR I /CD64(Human Receptor I for the Fc region of immunoglobulin G,Fc GammaR I )  G Fc段受體Ⅰ 96T

HIV p55+NP7： 艾滋病病毒抗體 CL-0397NCI-H23(人非小細胞肺癌細胞)5×106cells/瓶×2

SW038-C2-tk細胞，轉染了tk基因的SW038-C2細胞 副溶血性弧菌 人臍靜脈平滑肌細胞RNAHUVSMC miRNA5 μg 人抗BP180抗體(BP180-Ab)ELISA 試劑盒 PLGF (Placenta growth factor fragment)(human) 人胎盤生長因子(多肽抗原) 0.5mg

HIV p55+P6-Gag： 艾滋病病毒抗體 HA Others H1N1 甲型流感 H1N1 (A/Ohio/UR06-0091/2007) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照)

人組織細胞淋巴瘤細胞;U937 [U-937] 人抗BB抗體(BB-Ab)ELISA 試劑盒 PP-1 蛋酸酯酶-1(抗原) 0.5mg

HIV1 p55+p17： 艾滋病病毒抗體 人胚腎二倍體細胞;HEK-2

CHL中國倉鼠肺細胞WERI-Rb-1人視網膜神經膠質瘤細胞 WERI-Rb-1 human retinal glial cell RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS 大鼠花生四烯酸-12-脂加氧酶(ALOX12)ELISA試劑盒 Human LDL-IC  人低密度脂蛋白免疫復合物 96T

Pan Cytokeratin/p-CK： 廣譜細胞角蛋白PCK抗體 SFRP2 Others Mouse 小鼠 sFRP2 人細胞裂解液 (陽性對照)

山羊皮膚成纖維樣細胞;DG-S1 大鼠花生四烯酸(AA)ELISA試劑盒 CCK(Mouse Cholecystokinin)  小鼠膽囊收縮素/腸促肽 96T

PDZ RHOGEF/GTRAP48： Rho鳥甘酸轉運蛋白抗體 大耳山羊肺細胞;LDG-1

狗間葉干細胞(脂肪)(5×105) GBC-SD, 人膽囊癌細胞 Human 大鼠花生四烯酸(AA)ELISA 試劑盒 17-OHCS  大鼠17羥皮質類 96T

三、培養(yǎng)注意事項 

1. 收到細胞后首先觀察細胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現象，若有上述現象 發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。

2. 仔細閱讀細胞說明書，了解細胞相關信息，如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細胞因子等，確保細胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現問題，責任由 客戶自行承擔。

3. 用 75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態(tài)。因運輸問題，部分細胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現象。觀察好細胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細胞可以消化，懸浮細胞直接混勻收集細胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細胞后前 3 天各拍幾張細胞照片，記錄細胞狀態(tài)，便于和我司技術部溝通 交流。由于運輸的原因，個別敏感細胞會出現不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細胞 的具體情況，以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細胞僅供科研使用。

8. 備注：運輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細胞，請換用按照說明書細胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。     收到細胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。