公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

    a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。        

    b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細(xì)胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。        

     c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

     b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。  

三、培養(yǎng)注意事項(xiàng) 

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。

3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。     收到細(xì)胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個 T25 瓶傳 2 個 T25 瓶或者 2 個 6cm 皿。不是 1 個 T25 瓶傳 2 個10cm 皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

MRas： 原癌基因M-ras抗體 雜交瘤(B類);Z51B3C10H12A12G2F7E7

NCI-H520(人肺鱗癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 A549 [A-549](肺癌細(xì)胞) 大鼠心肌肌鈣蛋白C(TnC)ELISA試劑盒 MIP-1 Delta(Mouse Macrophage Inflammatory Protein 1 Delta)  小鼠巨噬細(xì)胞炎性蛋白1δ 96T

MCP1： 單核細(xì)胞趨化蛋白1抗體 敘利亞倉鼠肌肉細(xì)胞;GH-M1

IL18 Protein Mouse 重組小鼠 IL18 / IL-18 蛋白 大鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)ELISA試劑盒 L-LDH  大鼠L-鼠乳酸脫氫酶 96T

英文名稱： 抗體 CROT Others Human 人 CROT (474 Leu/Val) 桿狀病毒-昆蟲細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

貓星形腦膠質(zhì)細(xì)胞;PG-4(S+L-) 人泛素連接酶(E3/UBPL)ELISA 試劑盒 Fibulin 1 衰老關(guān)鍵蛋白抗原 0.5mg

HPV16 E6 protein： 人類狀瘤病毒16抗體 EB病毒轉(zhuǎn)化的人B淋巴細(xì)胞;KM9803

MCF-7(人癌細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 食蟹猴 EpCAM / OP-1 / TACSTD1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 人泛素結(jié)合酶(E2/UBCE)ELISA 試劑盒 FOS B FosB抗原 0.5mg

HIF-1 Alpha： 缺氧誘導(dǎo)因子1α 抗體 肝細(xì)胞生長添加物HGS

CCL13 Protein Human 重組人 CCL13 / MCP-4 蛋白 (His 標(biāo)簽) 人泛素激活酶(E1/UBAE)ELISA 試劑盒 FRA2/FOSL2(Fos related/like antigen 2) FOS樣抗原2 0.5mg

HPAC人胰腺癌細(xì)胞Pescadillo： 雌激素受體共調(diào)節(jié)因子抗體 大額牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;BOS-1

人胚肺二倍體細(xì)胞;KMB-17 人甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 大鼠反狀腺原酸(3)ELISA試劑盒 VEGF  大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子 96T

Persephin： PSP抗體 支氣管上皮細(xì)胞Many types of cells包裝：5 × 105次方(1ml)

TDGF1 Protein Human 重組人 Cripto / TDGF1 蛋白 (His 標(biāo)簽) 大鼠法尼酯X受體(FXR)ELISA試劑盒 TNF- Alpha  大鼠壞死因子α 96T

Pan-ras： Pan ras抗體 AGA Others Human 人 AGA / ASRG / Aspartylglucosaminidase 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)